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O município de Gurupi tem como uma de suas principais atividades produtivas o Agronegócio do Leite e seus derivados que desempenham um papel relevante no suprimento de alimentos e na geração de emprego e renda para a população. O consumidor, por sua vez, passou a ser mais exigente em qualidade. No caso do produtor, o maior efeito dessas transformações é traduzido pela maior concorrência. O presente trabalho tem como objetivo averiguar a prevalência de mastite bovina em leite comercializado no município de Gurupi. Com base nos resultados obtidos, procurou-se identificar se os produtores que vendem leite in natura, no município de Gurupi, realizam o manejo da ordenha de forma adequada e, por conseguinte, se atingem os melhores resultados com relação a qualidade e produtividade do leite. Para tanto, foram analisadas diversas amostras de leite coletadas em diferentes pontos de comércio urbano e em propriedades rurais selecionadas. Posteriormente, no laboratório do Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Tocantins – Campus Gurupi, as amostras foram submetidas ao teste com o Califórnia Mastite Teste (CMT) e, sucessivamente, foram classificados de acordo com seu grau e interpretação, conforme preconizado por Schalm & Noorlander (1957). Apenas 15,3% (15/98) das amostras de leite apresentaram escore negativo para mastite e 84,7% (83/98) apresentaram prevalência geral para a enfermidade na forma subclínica. A prevalência de mastite em leite in natura comercializado no município de Gurupi é alta, mesmo que em sua maioria sejam apenas traços.