A alface destaca-se dentre as hortaliças, como um dos cultivos mais expressivos em termos econômicos no Brasil. A produção de mudas é uma das técnicas de cultivo mais importante para implantação da cultura e a escolha do substrato é decisivo nesta fase. Os substratos para produção de mudas influenciam diretamente a germinação das sementes e crescimento das plântulas, por isso pesquisa de melhores fontes e suas combinações são importantes para desenvolvimento da atividade de produção de mudas de hortaliças. Portanto, objetivou-se avaliar o efeito de diferentes substratos para produção de mudas de alface. O experimento foi implantado em delineamento em blocos casualizados, com 4 repetições. Foram testadas 256 mudas produzidas em bandejas de polietileno, distribuídas em 8 tratamentos, sendo eles: T₁ = areia lavada, T₂ = húmus de minhoca, T₃ = casca de arroz carbonizada, T₄ = substrato comercial; T₅ = 75% húmus de minhoca + 25% casca de arroz carbonizada, T₆ = 75% húmus de minhoca + 25% substrato comercial, T₇ = 75% casca de arroz carbonizada + 25% substrato comercial, T₈ = solo. Foram analisadas as seguintes variáveis: altura da plântula, comprimento de raiz e peso da matéria seca. O substrato húmus de minhoca apresentou-se superior aos demais tratamentos, entretanto os substratos húmus de minhoca + casca de arroz carbonizada e húmus de minhoca + substrato comercial mostraram valores semelhantes.